תחום
PCR
שיטת PCR (Polymerase Chain Reaction) מכפילה מקטע DNA מוגדר במחזורי חימום וקירור חוזרים, בעזרת זוג פריימרים התוחם את המקטע המבוקש ואנזים פולימראז עמיד לחום. השיטה מאפשרת לקבל מיליוני עותקים מכמות התחלתית נמוכה, ולכן מהווה שלב בסיסי וקריטי בזיהוי פתוגנים, בגנוטיפינג, בשיבוט מולקולרי ובהכנת דגימות לריצוף.
28 יצרנים
18 נציגויות בישראל
יצרנים בתחום
מכשירי PCR 4
ריאגנטים ל-PCR 16
מתכלים ל-PCR 8
על התחום
תגובת PCR מתבצעת בתוך תרמוסייקלר (Thermal Cycler), ומורכבת משלושה שלבים מחזוריים: דנטורציה, שבה החום מפריד בין שני גדילי ה-DNA; הצמדת פריימרים (Annealing), שבה הפריימרים נקשרים לקצוות המקטע המבוקש; והארכה (Extension), שבה הפולימראז משלים גדיל חדש. תערובת התגובה כוללת דנ"א המשמש כתבנית, זוג פריימרים, dNTPs, בופר המכיל מגנזיום ואנזים פולימראז, כאשר בחירת האנזים משפיעה על אופי התוצר ואיכותו.
בחירת הריאגנטים נגזרת ממטרת הניסוי. אנזים Taq סטנדרטי מספיק כאשר השאלה היא נוכחות בלבד, כמו בבדיקת מושבות לאחר טרנספורמציה. לעומת זאת, אנזימי High-Fidelity בעלי פעילות תיקון (Proofreading) נדרשים כאשר רצף התוצר משמש בהמשך בשיבוט מולקולרי או לפני ריצוף. לטמפלטים ארוכים או עשירים ב-GC קיימות פורמולציות ייעודיות הכוללות תוספים מייצבים. ברמת הפורמט, שימוש ב-Master Mix מוכן מקטין את מספר פעולות הפיפטציה ואת השונות הנלווית להן, וגרסאות Hot-Start מונעות היווצרות תוצרים לא ספציפיים ופריימר-דימרים בעת ההכנה. נפח התגובה ופורמט הפלסטיק — כגון מבחנות 0.2 מ"ל או פלטות של 96 ו-384 בארות — חייבים להתאים באופן מדויק לבלוק של התרמוסייקלר הקיים.
לפני רכישה כדאי לבדוק את התאמת הפלסטיק לבלוק ולמכסה המחומם, שכן מגע חלקי גורם לאידוי ולשונות בין באריות. מבחינת הריאגנטים, יש לוודא מפרט טוהר מתאים כגון היותם נטולי DNase/RNase. כדאי לברר את תנאי האחסון, ובעבודה אבחונית נדרשים בנוסף סטטוס רגולטורי מתאים (לדוגמה, IVD) ותיעוד אצווה מלא.