חלבונים רקומביננטיים

ההחלטה המשמעותית ביותר בייצור חלבון רקומביננטי היא מערכת הביטוי, משום שהיא קובעת אילו שינויים לאחר תרגום (Post-Translational Modifications) יתרחשו. ב-E. coli הייצור מהיר וזול, אך אין גליקוזילציה, וחלבונים מורכבים נוטים להצטבר ב Inclusion Bodies שמחייבים קיפול מחדש. תאי יונקים כמו HEK293 או CHO מייצרים חלבון בקיפול תקין ובגליקוזילציה הומאנית, במחיר תפוקה נמוכה יותר וזמן ייצור ארוך. בין שני הקצוות ממוקמים שמרים ותאי חרק, שמשמשים כפשרה כשנדרשת תפוקה גבוהה לצד עיבוד אאוקריוטי חלקי.

בבחירת חלבון מקטלוג יש להסתכל מעבר לשם ולרצף. תגיות טיהור כמו His או Fc מקלות על העבודה אך עלולות להפריע לפעילות או לקשירה, ולכן חשוב לדעת היכן ממוקמת התגית ואם ניתן לחתוך אותה. גם הפורמולציה משנה: חלבון מיובש בהקפאה (Lyophilized) נוח לאחסון ולמשלוח, ואילו תמיסה מוכנה חוסכת שלב ומפחיתה איבוד חומר בהמסה מחדש.

לפני רכישה כדאי לוודא שהתיעוד כולל את מערכת הביטוי, את רצף חומצות האמינו ואת גבולות המקטע המיוצר, שכן שני מוצרים באותו שם עשויים להיבדל בקטע שנבחר ובפעילות הנובעת ממנו. בעבודה בתרבית תאים ובעיקר עם תאים ראשוניים ותאי גזע חשובה רמת האנדוטוקסינים, ולעיתים נדרש גם חלבון ללא רכיבים מן החי. לבסוף, כדאי לבחון את נתוני היציבות בתנאי האחסון המוצעים, מכיוון שחלבון פעיל הוא מהריאגנטים הרגישים ביותר לתנאי אחסון וטיפול ולשונות בין אצוות.